La recherche de staphylococcus aureus dans le lait cru :

Principe :

La recherche de s. aureus est basée sur l’emploi de milieux sélectifs :

-Milieu d ‘enrichissement : bouillon Chapman hypersalé.

-Bouillon de Giolitti et Cantoni.  

-Milieu d’isolement ou de dénombrement : gélose Chapman mannitée , gélose de Baird Parker.

- L’utilisation de la gélose Baird - Parker s’avère  intéressante en présence de souches de s. aureux typiques .

L’isolement ou le dénombrement réalisé , il y a lieu de déterminer le caractère pathogène des colonies retenues.

S. aureus possède 3 enzymes : la coagulase , la phosphatase, et une D-nase thermostable . Toutefois, divers traitements appliqués aux produits laitiers affectent les cellules de S. aureus et provoquent la perte de certains caractères, notamment au niveau de l’aspect des colonies sur les mi-lieux de culture.  

  Méthode d’enrichissement :

- Elle doit être appliquée a tous les produits laitiers pasteurisés susceptibles de contenir que très peu de cellules de S. aureus .

elle peut être supprimée pour les produits «  crus » présumés fortement contaminés

 Mode opératoire

- lntroduire 10 ml du produit à examiner ou de la suspension mère dans un flacon de 90 ml de bouillon de Giolitti et Cantoni.

- Puis dans 3 tubes de 19 ml de bouillon de Giolitti et cantoni , introduire 3 fois 1 ml de produit ou de la suspension mère.

-Placer le flacon et les tubes dans une jarre pour anaérobies. A défaut, couler

une couche de 5mm de gélose blanche.

Incubation :

Porter les 3 tubes et le flacon à l’étuve à 37°C pendant 48 heurs.

Résultats :

A partir de chacun des tubes présentant un noircissement ou une couleur grisâtre , préparer un étalement en vue de l’examen microscopique . 

Colorer les préparations par la technique de gram.

S’il y a présence de cocci plus ou mois en amas .continuer les investigations.

Toutefois, même si l’observation ne révèle aucun coque, il convient de

procéder au repiquage en vue d’isolement.

Méthode d’isolement et de dénombrement.

- Préparer une double série de boites de Pétri, et autant qu’il y a eu de résultats

positifs sur bouillon de Giolitti et Cantoni ou de dilutions à examiner.

- L’une des séries des boites est coulée avec la gélose Chapman mannitée ,

l’autre moitié avec la gélose Baird Parker.

- Après refroidissement, faire sécher les boites retournées couvercle

entr’ouvert, à l’étuve à 37°C pendant 30 minutes.

Isolement.

- Homogénéiser le contenu du flacon ou de chaque tube de bouillon de

Giolitti et Cantoni et à l’aide d’une anse bouclée effectuer un prélèvement

Par flocon ou par tube et le déposer à la surface du milieu sélectif à 1 cm

De la périphérie de la boite de Pétri. Etaler à l’aide de la même anse pour

Un isolement en stries.

- Répéter cette opération pour des bouillons ; ensemencer ainsi la gélose

Chapman mannitée et la gélose Baird Parker.

Dénombrement. 

- A l’aide d’une pipette de 1 ml prélever 0,1 ml de produit, de suspension-

mère ou dilution et déposer à la surface de la gélose Baird-Parker à 3 cm

environ de la périphérie d’une boite de Pétri de 100 mm de diamètre.

- A l’aide d’un étaleur en verre stérile, étaler convenablement sur toute

la surface du milieu.

- Laisser imprégner pendant 30 minutes.

Remarque – L’examen de 1 ml est possible en déposant successivement

dans 3 boites de Pétri de 100 mm de diamètre 0,3, 0,3 , et 0,4 ml ou dans

1 boite de Pétri de 140 mm de diamètre.

Incubation :

La gélose Chapman mannitée s’incube 48 heures à 37°C , la gélose Baird-paker 24 à 48 heures à 37 °C.

Résultats :

-gélose Chapman mannitée : S.aureus peut se présenter différemment , colonies convexes jaune citron , orange ou blanches , à contour régulier.

-gélose Baird-parker :

Colonies caractéristiques bien isolées les unes des autres , S.aureus se développe sous forme de colonies noires ou légèrement grises bordées d’un liseré blanc , entourées d’un halo éclaircissant le milieu.

Lors du dénombrement , retenir pour comptage les boites contenant moins de 150 colonies.

Compter les colonies typiques d’une part et les colonies atypiques d’autre part.

(L.lapied)