Leuconostoc :

Principe :

Il repose essentiellement sur la formation de dextrane à partir du saccharose contenu dans le milieu de culture.

Mode opératoire :

Méthode d’isolement :

-couler des boites de pétri avec la gélose hypersaccharosée. laisser refroidir jusqu’à gélification.

-mettre à sécher à l’étuve à 37°c pendant 30 minute ; couvercle entr’ouvert ,

boites retournées.

-pratiquer un isolement à partir de chacun des tubes de bouillon préenrichi . déposer 3 anses bouclées et étaler en stries.

Incubation :

Tous les ensemencements sont mis à l’étuve à 30°c pendant 48 heures .

Résultat et interprétation :

Les leuconostocs se développent sur la gélose hypersaccharosée en donnant des colonies incolores , c’est-à-dire transparentes , d’aspect muqueux ou gélatineux , du moins pour les espéces qui forment des dextranes à partir du saccharose.

Examiner les boites , retenir pour estimation celles qui présentent un développement de leuconostoc.

Evaluer selon le mode de recherche :

-méthode par enrichissement et isolement : par le nombre approximatif ou le nombre le plus probable pargramme de produit.

Méthode directe de dénombrement : compter les colonies typiques.

Exprimer les résultats par gramme de produit.

Recherche du bacille tuberculeux :

Préparation des frottis :

-Centrifuger , dans un tube à centrifuger stérile , 5 cm3 de lait pendant 5 minutes.

-Faire deux frottis avec la crème à l’aide d’une anse stérile.

-Enlever l’anneau de crème et le  liquide , puis mélanger le culot avec un peu de liquide restant.

-Effectuer deux autres frottis à partir du culot remis en suspension.

-Sécher les frottis ; les fixer à froid à l’éthanol absolu par immersion pendant 5 minutes.

-Dégraisser ensuite au xylène pendant 5 minutes , puis rincer à l’éthanol puis à l’eau.

Coloration :

On utilisera de préférence une technique à froid , la coloration de kinyoun.

-Recouvrir le frottis de fuchsine phénique de kinyoun 5minutes sans chauffer.

-Rincer à l’eau du robinet.

-Recouvrir le frottis du mélange acide alcool de kinyoum pendant 3 minutes.

-Rincer à l’eau du robinet.

-Recouvrir le frottis de bleu de méthyléne phéniqué pendant 1 à 3 minutes.

-Rincer et sécher.

Observation :

Rechercher , sur toute la lame , s’il y a des bacilles roses , colorés par la fuchsine , ont résisté à l’action décolorante de l’acide fort et de l’éthanol . Ils sont dits acido-alcoolo-résistants ou BAAR.

Interprétation  des résultat :

Ces BAAR ont de grandes chances d’être des mycobactéries.

L’interprétation doit tenir compte du fait que les mycobactéries que l’on peut trouver dans le lait sont :

-Mycobacterium tuberculosis , mycobacterium bovis , agents de la tuberculose.

-Des mycobactéries commensales .

Avant de conclure à une infection tuberculeuse , on aura donc à confirmer , par leur isolement et leur identification et par l’étude de leur pouvoir pathogène expérimental , la nature des mycobactéries observées.

Il faut noter l’extrême gravité de ce mode d’infection de la tuberculose , aujourd’hui très rare. D’autre part , c’est Mycobacterium bovis qui infecte normalement la vache (et l’homme ) mais le lait peut être contaminé par un malade atteint par Mycobacterium bovis ou Mycobacterium tuberculosis.